- 转化医学以药物研发过程中生物标志物为主题 ，以精准医疗提高药物研发临床应答率为指标 ，覆盖从早期靶点确认——临床前R&D ——临床I、II、III期Development ，到上市后的药物检测 ，通过分歧阶段的钻研实现药物研发的关环。
- 01
- 02
- 03
- 04临床钻研
- 05上市
随着基因组学、蛋白质组学和代谢组学等多组学分析技术不休地发展 ，医治方式已经从传统幼分子扩大到多肽、蛋白、抗体、基因疗法、细胞疗法等多种新型技术。只管有这些新技术 ，但仍有大量疾病的致病原因还无法彻底领略。转化医学将生物医学观察和钻研转化为改善健全的过问措施的过程 ，加快了基础钻延注新药开发的和临床转化的过程 ，成为精准靶向医治的加快器。转化医学钻研利用各类钻研伎俩 ，确定靶点与疾病产生发展的关系、验证和索求药物的作用机造、发现生物标志物并开发伴随诊断产品 ，以及为临床钻研发展筛选最相宜的人群和适应症等 ，从而提高新药研发效能和成功率。
将转化医学里程碑叠加到药物开发阶段[1]BB贝博请回覆：什么是转化医学
服务平台
免疫组化技术平台- 免疫组化简介免疫组化 ，也称免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。是指利用免疫学根基道理即抗原与抗体特异性结合的道理 ，通过化学反映使象征抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原（多肽和蛋白质） ，对其进行定位、定性及相对定量的钻研。凭据抗原抗体反映和化学显色的道理 ，组织切片或细胞样本中的抗原先和一抗结合 ，再利用一抗与二抗反映 ，DAB进行显色 ，进而进行分析。重要步骤组织处置、固定、切片抗原建复除去内源性过氧化物酶封关一抗、二抗孵育检测复染
- 组织处置、固定、切片组织固定可保留抗原 ，预防采集的组织自溶和坏死。组织包埋可在切片过程中对组织提供支持 ，使切片更坚实。
石蜡切片 冰冻切片 固定 包埋前：甲醛 切片前或切片后：甲醛、甲醇、乙醇或丙酮 切片 切片机 冰冻切片机 贮存 室温下贮存多年 -80 °C下贮存1年 （-190°C下贮存功夫更长） 优势 容易操作 ，不会败坏切片 ? 保留酶的职能和抗原性
? 尝试流程简短（通常不必要冗长的固定步骤）
局限性 ? 过度固定会覆盖抗原表位 ，进而增长抗原建复的需要
? 处置功夫长：在梯度酒精和二甲苯中逐步脱水 ，以便于石蜡渗入。
? 若是没有急剧冷冻组织”可能会形成冰晶 ，从而粉碎组织结构
? 冰冻切片通常比石蜡切片厚 ，可能会导致分辨率低、图像差
? 可能必要阻断内源活性酶。
石蜡切片 vs冰冻切片 - 处置流程
- 抗原建复对甲醛固定的组织切片进行抗原建复 ，以露出抗原位点 ，从而使抗体结合。
扰渍导的抗原表位建复 蛋白水解酶诱导的抗原表位建复 优势 抗原表位的建复更和善 ，参数更可控。 合用于较难建复的抗原表位。 ph值 通常使用pH6的缓冲液 ，但碱性缓冲液也在宽泛使用。必须通过尝试确定 pH值通常为7.4。 温度 约95°C。 通常为37°C 孵育功夫 10-20分钟 10-15分钟 缓冲液组分 取决于靶抗原所需的pH 值。常用的缓冲液蕴含柠檬酸钠、EDTA和Tris-EDTA 酶(如胃蛋白酶、蛋白酶K 或胰蛋白酶)的中性缓冲液。 当苦衷项 微波炉加热可能会导致抗原建复不均匀。剧烈沸腾会导致脱片(组织与载玻片分离）。 酶建复有时会粉碎切片的状态- 浓度和功夫必要优化 抗原建复的重要步骤 - 封关用血清或BSA封关 ，预防抗体的非特异性结合 ，并降低布景和潜在的假阳性了局。? 蛋白封关：使用血清或BSA 进行封关对于预防抗体与组织或Fc 受体（与抗体恒定区（Fc）结合的受体）产生非特异性结合至关沉要。二抗种属起源的血清是很好的封关试剂。使用牛血清白蛋白（BSA）或酪蛋白 ，可用于阻断非特异性抗体结合。? 生物素封关：在使用基于亲和素/生物素的检测系统时 ，阻断内源性生物素 ，由于内源性生物素存在于很多组织中 ，出格是肾脏、脾脏、肝脏和大脑中。用亲和素与组织孵育 ，阻断内源生物素 ，而后用表源生物素孵育 ，以阻断亲和素分子上额表的生物素结合位点。
- 检测? 酶显色法：显色检测使用酶可能催化可溶性底物产生有色沉淀。这些酶通常偶联在二抗上 ，也能够偶联在一抗上用于直接检测。最常用的酶有HRP 和AP ，前者将DAB 转化成棕色产品 ，后者将3-氨基-9-乙基咔唑 (AEC) 转化成红色产品。显色检测通常迸撰光检测更活络。此表 ，分歧于荧光染料 ，有色沉淀物有光不变性 ，因而染色切片可能保留多年。荧光检测必要使用专业荧鲜明微镜和滤光片 ，显色检测仅需使用尺度显微镜。然而 ，显色检测的孵育和封关步骤迸撰光法更多 ，功夫也更长。? 荧光法：荧光检测（免疫荧光）是基于荧光基团被特定波长的光引发后发射波长较长的荧光的个性。荧光检测时时用于必要同时检测多种抗原的情况。荧光染料能够与一抗或二抗直接偶联 ，也可与链霉素亲和素偶联。
- 案例赏析：PD-L1, Ki-67, Her2, CD31, CD163, FoxP3
IHC Analysis of the expression ofa)PD-L1 from lung adenocarcinoma[3]; b)Ki-67 from periampullary tumors[4]; c)Her2 from lung tumor[5]; d)CD31 from human gastric adenocarcinoma[6]; e)CD163 (M2 TAM marker) from oral squamous cell carcinoma (OSCC)[7]; f)FoxP3 from human glioblastoma[8].
总结与瞻望- 基于基因组学、蛋白组学、细胞组学及病理组学等综合性转化医学平台；高质量的研发治理团队；BB贝博转化医学平台致力于为全球合作同伴提供全方位生物标志物发现、靶点验证、伴随诊断开发与贸易化检测等一体化解决规划。? 以ELISA、ECL（MSD), SIMOA（HD-X), Biacore 8K 技术构建的的蛋白质相互作用 ，蛋白水平生物标志物平台；? 以流式细胞术（BD Symphony A3 ，BD Fortesssa, Beckman CytoFLEX S）为主构建的细胞水平生物标志物平台；? 以荧光定量PCR技术构建的多沉核酸水平生物标志物平台；? 免疫组化（TAMs-IHC ，FISH）技术构建的病理水平生物标志物平台等。
- 参考文件：[1] Hugues Dolgos, et al. Translational Medicine Guide transforms drug development processes: the recent Merck experience. Drug Discov Today. 2016 Mar;21(3):517-26. doi: 10.1016/j.drudis.2016.01.003.[2] Ying Xu, et al. A Selective Small-Molecule c-Myc Degrader Potently Regresses Lethal c-Myc Overexpressing Tumors. Adv Sci (Weinh). 2022 Mar;9(8):e2104344. doi: 10.1002/advs.202104344.[3] Jonas J Heymann, et al. PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens. Cancer Cytopathol. 2017 Dec;125(12):896-907. doi: 10.1002/cncy.21937.[4] Mark M Aloysius, et al. Predictive value of tumor proliferative indices in periampullary cancers: Ki-67, mitotic activity index (MI) and volume corrected mitotic index (M/V) using tissue microarrays. World J Surg. 2010 Sep;34(9):2115-21. doi: 10.1007/s00268-010-0681-3.[5] Montse Verdu, et al. Cross-reactivity of EGFR mutation-specific immunohistochemistry assay in HER2-positive tumors. Appl Immunohistochem Mol Morphol. 2015 Sep;23(8):565-70.[6] Qingling Wang, et al. EPCR promotes MGC803 human gastric cancer cell tumor angiogenesis in vitro through activating ERK1/2 and AKT in a PAR1-dependent manner. Oncol Lett. 2018 Aug;16(2):1565-1570. doi: 10.3892/ol.2018.8869.[7] Faustino J Suárez-Sánchez, et al. Macrophages in Oral Carcinomas: Relationship with Cancer Stem Cell Markers and PD-L1 Expression. Cancers (Basel) (IF: 6.13; Q1). 2020 Jul 2;12(7):1764. doi: 10.3390/cancers12071764.[8] Qi Yue, et al. The prognostic value of Foxp3+ tumor-infiltrating lymphocytes in patients with glioblastoma. J Neurooncol. 2014 Jan;116(2):251-9. doi: 10.1007/s11060-013-1314-0. Epub 2013 Nov 26.[9] Christopher P Austin.Opportunities and challenges in translational science. Clin Transl Sci. 2021 Sep;14(5):1629-1647. doi: 10.1111/cts.13055.
